發(fā)光細菌的急性毒性試驗

添加日期：2017年10月17日 閱讀：4257

發(fā)光細菌作為毒性檢測的生物學方法，因其簡便、快速、靈敏且成本較低而日益受到重視。本試驗項目推薦兩個方法。一為國家環(huán)境保護局于1995年發(fā)布的發(fā)光細菌法(GB/T15441-1995)，采用的是海洋發(fā)光細菌菌種;二為淡水發(fā)光菌法，采用的是淡水型發(fā)光菌種。

明亮發(fā)光桿菌T3法(A)

本方法適用工業(yè)廢水、納污水體及實驗室條件下，可溶性化學物質的水質急性毒性監(jiān)測。



1.原理

基于發(fā)光細菌相對發(fā)光度與水樣毒性組分總濃度呈顯著負相關(P≤0.05)，因而可通過生物發(fā)光光度計測定水樣的相對發(fā)光度，以此表示其急性水平。

水質急性毒性水平可按選用相當的參比物氯化汞濃度(以mg/L為單位)來表征，或選用EC50值(半數有效濃度，以樣品液百分濃度為單位)來表征。

2.樣品的采集與保存

①采樣瓶使用聚四氟乙烯襯墊的玻璃瓶，務必清潔、干燥。采集水樣時，瓶內應充滿水樣不留空氣。采樣后，用塑膠帶將瓶口密封。

②毒性測定應在采樣后6h內進行。否則應在2-5℃下保存樣品，但不得超過24h。報告中應寫明水樣采集時間和測定時間。

③對于含固體懸浮物的樣品須離心或過濾去除，以免干擾測定。

3.儀器設備

①生物發(fā)光光度計：配置2ml或5ml測試管。

當氯化汞標準溶液濃度為0.10mg/L時，發(fā)光細菌的相對發(fā)光度為50%，其誤差不超過±10%。

②2ml或5ml測試樣品管(具標準磨口塞，為制造比色管的玻璃料制作，由專業(yè)玻璃儀器廠制造)，分別適用于相應型號的生物發(fā)光光度計。

③微量注射器：10μl。

④注射器：lml。

⑤定量加液瓶：5ml。

⑥吸管：2ml、10m1、25ml。

⑦試劑瓶：l00ml。

⑧量筒：100ml,500ml。

⑨棕色容量瓶：50ml、250ml、1000ml。

⑩半微量滴定管(配磨口試液瓶，全套儀器均為棕色)：l0ml。

4.試劑和材料

除另有說明外，本方法所用試劑均應為符合國家標準的分析純試劑、蒸餾水或同等純度的水。

①氯化汞HgCl2。

②氯化鈉NaCl，化學純。

③明亮發(fā)光桿菌T3小種(PhotobacteriumphosphoreumT3spp.)凍干粉，安瓶瓶包裝，每瓶0.5g，在2-5℃冰箱內有效保存期為6個月。新制備的發(fā)光細菌休眠細胞(凍干粉)密度不低于每克800萬個細胞;當按5(3)④步驟將凍干粉復蘇2min后即發(fā)光(可在暗室內檢驗，肉眼應見微光)，稀釋成工作液后每毫升菌液不低于1.6萬個細胞((5ml測試管)或2萬個細胞(2ml測試管)(均為稀釋平板法測定)。在生物發(fā)光光度計上測出的初始發(fā)光量應在600-1900mV之間，低于600mV允許將倍率調至“×2”檔，高于1900mV允許將倍率調整至“×0.5”檔。仍達不到標準者，更換凍干粉。

④氯化鈉溶液，3g/100m1：氯化鈉3g于玻璃容器內，用量筒加蒸餾水l00ml。

⑤氯化鈉溶液，2g/l00ml氯化鈉2g，加蒸餾水l00ml于試劑瓶內，2-5℃保存。

⑥參比物氯化汞標準溶液：0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.18、0.20、0.22、0.24mg/L。

⑦氯化汞母液，ρ=2000mg/L:1/萬分析天平精稱密封保存良好的無結晶水氯化汞0.1000g于50ml容量瓶中，用3g/100m1氯化鈉溶液稀釋至刻度，置2-5℃冰箱備用，保存期6個月。

⑧氯化汞工作液，ρ=2mg/L：用移液管吸氯化汞2000mg/L母液l0ml于l000ml容量瓶中，用3g/l00ml氯化鈉溶液定容。再用移液管吸取氯化汞20mg/L液25ml于250m1容量瓶中，用3g/l00m]氯化鈉溶液定容。將此液倒入配有半微量滴定管的試液瓶，然后用3g/l00ml氯化鈉溶液將氯化汞2mg/L溶液按表5-3-6稀釋成系列濃度(一律采用50ml容量瓶)。氯化汞工作液保存期不能超過24h，超過者務必重配。



責任編輯：趙帥超 www.4077222.com 2017-10-17 16:16:17

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