談�；撬釋�(duì)大鼠視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)損傷保護(hù)作用(一)

添加日期：2010年5月8日 閱讀：983

　　興奮性氨基酸(EAA)引起的興奮毒性是糖尿病視網(wǎng)膜病變〔1〕、青光眼、視網(wǎng)膜變性等疾病的視網(wǎng)膜神經(jīng)元損傷及死亡的主要機(jī)制之一。體內(nèi)研究表明，視網(wǎng)膜的興奮毒性主要由N甲基D天冬氨酸(NmethylDaspartate,NMDA)受體介導(dǎo)〔2〕。牛磺酸(Taurine)是視網(wǎng)膜含量*豐富的游離氨基酸，近年來發(fā)現(xiàn)，�；撬峥梢员Ｗo(hù)培養(yǎng)的小腦顆粒細(xì)胞對(duì)抗興奮毒性損傷〔3〕。本實(shí)驗(yàn)通過在大鼠玻璃體內(nèi)注射NMDA制備視網(wǎng)膜興奮毒性損傷模型，觀察�；撬釋�(duì)NMDA誘導(dǎo)的視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)及超微結(jié)構(gòu)損傷的保護(hù)作用。
　　1   材料與方法
　　11   實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及視網(wǎng)膜NMDA興奮毒性損傷動(dòng)物模型的建立   成年雄性SpragueDawley大鼠20只，體質(zhì)量200～250g(第三軍醫(yī)大學(xué)野戰(zhàn)外科研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK(軍)2002008。大鼠腹腔注射速眠新注射液01ml/100g(長(zhǎng)春軍需大學(xué)獸醫(yī)研究所)麻醉，5%托品酰胺散瞳，1%利多卡因進(jìn)行角膜表面麻醉，用微量注射器從顳上方鞏膜距角膜緣外3mm處進(jìn)針，見針尖到達(dá)玻璃體中后部后，緩慢注入5μl 4mmol/L的NMDA〔2〕。潔霉素滴眼預(yù)防感染。眼瞎大鼠棄去。
　　12   實(shí)驗(yàn)分組   20只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為4組：(1)正常對(duì)照組；(2)NMDA組；(3)NMDA+牛磺酸干預(yù)組；(4)磷酸鹽緩沖液(PBS)對(duì)照組；每組5只大鼠。正常對(duì)照組不進(jìn)行任何處理；NMDA組為上述模型組；�；撬岣深A(yù)組于眼內(nèi)注射NMDA前1h及其后每天腹腔注射�；撬�(25mg/kg〔4〕)，共注射3d；PBS對(duì)照組于玻璃體內(nèi)注射5μl 01mol/L PBS。玻璃體注射后第4d觀察指標(biāo)變化。NMDA、牛磺酸(美國(guó)Sigma公司)，用無菌01mol/L PBS稀釋。
　　13   視網(wǎng)膜組織病理學(xué)觀察及視網(wǎng)膜厚度測(cè)量   腹腔注射2ml/100g 03%戊巴比妥鈉處死大鼠，迅速摘取右眼，去除前節(jié)、晶狀體及玻璃體，將眼杯用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，經(jīng)視乳頭切片(5μm)，蘇木精伊紅(HE)染色，觀察視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)并照相，LEICA Q WIN圖像分析軟件于距視乳頭中心15mm處雙側(cè)測(cè)量視網(wǎng)膜全層及視見網(wǎng)膜內(nèi)層(包括內(nèi)核層、內(nèi)網(wǎng)狀層、節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層)厚度，每只眼球取6張切片，每組5只大鼠結(jié)果求平均值。
　　14   視網(wǎng)膜超微結(jié)構(gòu)觀察   按前法處死大鼠，摘取左眼，將眼杯迅速置于4℃預(yù)冷的3%戊二醛固定，常規(guī)1%钅我酸固定，系列丙酮脫水，環(huán)氧樹脂浸透包埋，經(jīng)光鏡定位后行超薄切片，于TENCAI10 PHILIPS透射電鏡下觀察視網(wǎng)膜各層細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)。
　　15   統(tǒng)計(jì)分析   采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間比較用單因素方差分析。
        責(zé)任編輯：小季     4077222.com    2010-5-8 18:01:35

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