探討棕葉花提取物對(duì)動(dòng)物離體子宮的興奮作用

添加日期：2010年5月8日 閱讀：1596

    棕葉花（別名冬葉花、柊葉花）Phrynium capitatum Willd (flower)為竹芋科（Marantaceae）多年生本草，分布廣西、廣東、云南等地。全草可入藥。文獻(xiàn)記載：“全草味甘淡，性微寒，有清熱解毒、涼血、止血和利尿之功效�！睆V西少數(shù)民族民間有用其花治療月經(jīng)過多、血崩（功能性子宮出血）及失音等疾病之經(jīng)驗(yàn)（《廣西民族藥簡(jiǎn)編》，1980廣西藥品檢驗(yàn)所印行）。有文章報(bào)道棕葉花水提取物對(duì)孕或非孕小鼠、大鼠、豚鼠、家兔離體子宮及對(duì)家兔在體子宮都有興奮作用［1］，而關(guān)于其他溶劑提取物的藥理研究尚未見報(bào)道。為了進(jìn)一步研究其他溶劑提取物對(duì)子宮的興奮作用，本文采用BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，觀察棕葉花正丁醇、水溶性組分兩種提取液對(duì)非孕或注射乙烯雌酚后家兔、豚鼠、大鼠、小鼠離體子宮的影響，并用EC50與益母草流浸膏進(jìn)行比較。
　　1  器材與方法
　　1.1 受試藥物與試劑棕葉花采自南寧地區(qū)，曬干備用。受試藥物的制備：取干棕葉花750 g用中藥材粉碎機(jī)粉碎后置10 000 ml圓底燒瓶中加95%乙醇浸沒，加熱冷凝回流1 h，抽濾，重復(fù)上述操作3次；藥渣50%乙醇浸沒，熱冷凝回流1 h，抽濾，重復(fù)3次。合并濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮。再加適量蒸餾水使?jié)饪s物完全溶解，置6 000 ml的錐形瓶中，加石油醚1 000 ml振搖1 h，然后離心15 min（6 000 r/min），取上層液體，如此重復(fù)5次；剩下部分用醋酸乙酯、正丁醇、蒸餾水重復(fù)石油醚操作。所得的石油醚（為1號(hào)）、醋酸乙酯（為2號(hào)）、正丁醇（為3號(hào)）、水溶性組分（為6號(hào)）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，45℃烘干后置冰箱備用。益母草流浸膏經(jīng)烤箱60℃烘干，固體經(jīng)磨粹后放入磨口玻璃瓶備用.
　　試劑：石油醚由廣州化學(xué)制劑廠出品（批號(hào)20040501）；乙酸乙酯購自廣東精密化學(xué)品公司（批號(hào)20050203）；正丁醇購自廣東光華化學(xué)廠有限公司（批號(hào)20040717）；益母草流浸膏為桂林漓江益佰制藥廠產(chǎn)品（批號(hào)20050617）。
　　1.2  儀器SYC-15超級(jí)恒溫水�。ū本┥Ａ﹄娮釉O(shè)備廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；BL-410生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟電子有限公司）。
　　1.3 動(dòng)物昆明種小鼠、Wistar大鼠、家兔、豚鼠均由桂林醫(yī)學(xué)院動(dòng)物室提供。
　　1.4  動(dòng)物離體子宮標(biāo)本的制備取正�；蚪�(jīng)產(chǎn)未孕小鼠、大鼠、豚鼠和家兔，脫頸椎處死后剖腹取出子宮，立即置于盛有營(yíng)養(yǎng)液（小鼠用Tyrode［2］氏液、大鼠用DeJaion氏液［3］、家兔用Krebs氏液［2］、豚鼠用Van Dyke-Hasting［2］氏液）的玻璃皿中，剝離子宮壁上附著脂肪組織，將一側(cè)子宮角的兩端分別用線結(jié)扎，按文獻(xiàn)方法［4］一端固定于通氣鉤上，另一端連接在張力換能器（小鼠、大鼠和豚鼠用0～3 g，家兔用5 g張力換能器）上，置于含30ml營(yíng)養(yǎng)液的麥?zhǔn)显〔�，通入氧氣，每秒�?～2個(gè)小氣泡，麥?zhǔn)显〔酆銣卦?37±0.5)℃，張力換能器連于BL-410生物信號(hào)采集系統(tǒng)，調(diào)零、定標(biāo)。增益調(diào)節(jié)G=50，時(shí)間常數(shù)T=DC，濾波調(diào)節(jié)F=30Hz，掃描速度S=16.00s/div［4］。穩(wěn)定10 min后，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
　　1.5  給藥方法待標(biāo)本穩(wěn)定10 min后，加入正丁醇組分（0.1 g/ml）不同劑量，先測(cè)出興奮子宮的*低有效量，然后按*低有效量依次增加劑量，直至子宮收縮達(dá)到*大效應(yīng)，每次加藥后觀察和記錄10min離體子宮收縮活動(dòng)，更換營(yíng)養(yǎng)液，沖洗3次，再加下一個(gè)濃度。小鼠*終濃度為0.16～3.3 mg/ml，大鼠*終濃0.33～3.3 mg/ml，家兔*終濃度為0.33～2.00 mg/ml，豚鼠*終濃度為0.03～0.40 mg/ml。水溶性組分、益母草流浸膏組分均按上述方法操作。
　2  結(jié)果
　　2.1  對(duì)小鼠、大鼠離體子宮平滑肌的影響
　　正�；蚪�(jīng)產(chǎn)未孕小鼠、大鼠各8只，3號(hào)與6號(hào)均能引起大鼠、小鼠離體子宮興奮，使小鼠、大鼠離體子宮收縮頻率、收縮振幅和收縮張力增加。大鼠子宮在劑量大于2.67 mg/ml時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)直，小鼠子宮在劑量大于2.00 mg/ml時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)直，并維持20 min以上，用營(yíng)養(yǎng)液沖洗后子宮可復(fù)原。結(jié)果見圖1～2。小鼠在*終濃度為0.16～3.3 mg/ml的濃度范圍內(nèi)呈量-效關(guān)系，大鼠子宮在*終濃度為0.33～3.3 mg/ml的濃度范圍內(nèi)呈量-效關(guān)系，在無自動(dòng)節(jié)律收縮的子宮肌段，3號(hào)、6號(hào)均可使小鼠、大鼠離體子宮產(chǎn)生節(jié)律性地收縮。注射己烯雌酚后的小鼠（0.2 mg/kg）、大鼠（0.5 mg/kg）上述作用更為明顯。結(jié)果見圖3～4。
    益母草流浸膏濃縮物無論對(duì)孕或非孕大鼠、小鼠離體子宮作用不明顯。
　　2.2 對(duì)妊娠家兔離體子宮平滑肌的影響妊娠家兔4只，共實(shí)驗(yàn)4次，結(jié)果一致， 3號(hào)與6號(hào)均能引起家兔子宮的興奮，使子宮肌的收縮頻率、收縮振幅和收縮張力增加。在*終濃度為0.33～2.00 mg/ml的濃度范圍內(nèi)呈量-效關(guān)系。結(jié)果見圖5～6。
　　2.3 對(duì)正常豚鼠離體子宮平滑肌的影響未孕成年豚鼠8只，小劑量*終濃度為0.03 mg/ml，就能引起豚鼠離體子宮的興奮，使無自主收縮的子宮出現(xiàn)收縮。隨著劑量的增加，離體子宮的收縮頻率和幅度加快和增強(qiáng)。在劑量大于*終濃度為0.33 mg/ml時(shí)出現(xiàn)強(qiáng)直，這表明豚鼠對(duì)3號(hào)和6號(hào)更為敏感。結(jié)果見圖7～8。
　　2.4 計(jì)算EC50以每次加入藥物后興奮子宮平滑肌的*大效應(yīng)為**，求出藥物興奮子宮的量效關(guān)系，以振幅的百分?jǐn)?shù)為y軸，以*終濃度為x軸，代入回歸方程y=ax+b，經(jīng)計(jì)算機(jī)（Windows98, Microsoft Excel數(shù)據(jù)分析工具）求出a和b，再求出平均50%的效應(yīng)即EC50。結(jié)果見表1。表1   正丁醇組分和水溶性組分及益母草流浸膏對(duì)不同動(dòng)物離體子宮的EC50（略）
　　3  討論
    實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，棕葉花正丁醇組分、水溶性組分均能使非孕或注射己烯雌酚后大鼠、小鼠、豚鼠、家兔離體子宮平滑肌的收縮頻率增快、收縮幅度增強(qiáng)、張力明顯提高，提示這兩種提取物均含有興奮子宮平滑肌的活性物質(zhì)。通過水溶性組分、正丁醇組分對(duì)小鼠、大鼠離體子宮EC50的比較，前者興奮子宮作用比后者稍強(qiáng)（見表1），提示活性物質(zhì)在水溶液中含量比在正丁醇稍多。通過注射己烯雌酚后的比較（見表1），其結(jié)果表明雌激素對(duì)兩種組分的子宮平滑肌興奮有增強(qiáng)作用；與益母草流浸膏EC50的比較，其興奮子宮作用明顯強(qiáng)于益母草（P<0.05），其中對(duì)豚鼠子宮的興奮作用*強(qiáng)（P<0.01）。而石油醚、醋酸乙酯組分對(duì)離體子宮興奮作用微弱。
    棕葉花除了對(duì)子宮有興奮作用外，其植物其他部分是否有興奮子宮作用尚需進(jìn)一步研究，對(duì)正丁醇和水溶性組分中的活性物質(zhì)有待進(jìn)一步分離提純和鑒定。
        責(zé)任編輯：小季     4077222.com    2010-5-8 18:46:03

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